1． 提取基因DNA（含癌基因）。
2．DNA準(zhǔn)備：取供體DNA50～100微克，加3M NaCl或醋酸鈉使*終濃度至0.3M混勻。
3．再加2倍體積無水乙醇，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，去上清。
4．加入轉(zhuǎn)染緩沖液，待DNA充分融解后，再加入2.5M CaCl2，令*終濃度為125mM，用吸管輕輕吹打三次。置室溫下10～30分鐘，待液體透明度降低，出現(xiàn)微濁藍(lán)色時(shí)，即可用于轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞。
5．細(xì)胞：取生長狀態(tài)良好、處于半?yún)R合階段的指數(shù)增生期細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)，更換培養(yǎng)液1次。
6．轉(zhuǎn)染：向每瓶中加DNA－磷酸鈣沉淀物0.5～1ml/瓶，置37℃作用4～6小時(shí)。
7．培養(yǎng)：棄去培養(yǎng)液，用15％甘油處理3分鐘，無血清培養(yǎng)漂洗1次，加入新培養(yǎng)液，37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。
8．傳代：按1：5或1：10分瓶傳代，每2～3天換液1次，接近匯合時(shí)血清用量降至5％，培養(yǎng)2～3周。
9．檢測：逐日觀察，待出現(xiàn)轉(zhuǎn)化灶后，分離入另瓶中培
公安機(jī)關(guān)備案號：
